Trong bóng tối của thành phố New York, nhóm Ninja Rùa đang chuẩn bị cho một nhiệm vụ mới. Leonardo, sĩ quan trưởng kiên cường, chiến đấu dũng mãnh trên đỉnh tòa nhà cao chọc trời. Michelangelo, người hóm hỉ và hài hước, đang tìm kiếm vệ khí mới để trổ tài khi bước vào trận chiến. Donatello, thông minh và tinh tế, phải giải quyết một trở ngại kỹ thuật phức tạp trước khi tham gia vào cuộc phiêu lưu. Cuối cùng, Raphael, mạnh mẽ và cứng rắn, túm nắn kiếm ninja sẵn sàng đối đầu với kẻ thù.
Trong khi họ chuẩn bị, Splinter, sư phụ của họ, nhận ra rằng một âm mưu tăm tối đang đe dọa thế giới. Nhóm phải đoàn kết và sử dụng tất cả khả năng của mình để đối phó với thử thách mới, đồng thời phải đối diện với quá khứ đen tối và bí ẩn của mình. Liệu những người hùng trẻ tuổi có vượt qua được? Hay họ sẽ phải đối mặt với những sự thật đau lòng và quyết định khó khăn nhất trong cuộc đời mình? Điều duy nhất chắc chắn, cuộc phiêu lưu lần này sẽ thách thức và thay đổi họ mãi mãi.